Avaliação da citotoxicidade e da genotoxicidade da mistura da clorexidina com hipoclorito de sódio sobre diferentes linhagens celulares / Evaluation of the Interaction between Sodium Hypochlorite and Chlorhexidine Gluconate and its Effect on Cytotoxicity and Genotoxicity of cell cultures

O uso de irrigação com solução de hipoclorito de sódio a 1% (NaOCl) seguida de irrigação final com solução de clorexidina a 2%(CHX) pode promover uma melhor antissepsia do sistema de canais radiculares do que as abordagens tradicionais. Já foi relatado que estas substâncias quando entram em contato dentro do sistema de canais radiculares produzem subprodutos a partir de sua mistura, que apresentam uma fase líquida e uma fase sólida precipitada que permanece nas paredes do canal radicular. Sua ação citotóxica em cultura de células ainda não foi estudada. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito desta mistura e seus subprodutos in vitro sobre a viabilidade celular. Para avaliar se o grau de diferenciação pode afetar a sobrevivência celular foram escolhidas para o experimento fibroblastos de gengiva humana (FMM1) que são células mais diferenciadas e células-tronco de polpa dentária humana (PDH3) menos diferenciadas. Métodos: partes iguais de soluções de hipoclorito 1% (NaOCl) e digluconato de clorexidina 2% (CHX) foram misturadas e os subprodutos obtidos. Os grupos experimentais testados foram: G1- CHX, G2- NaOCl + CHX(fase líquida), G3- NaOCl + CHX(fase sólida). Quatro(4) diferentes concentrações (100%, 1%, 0,5% e 0,25%) das substâncias de G1 e G2 e do meio de cultivo condicionado pelo G3, foram aplicadas às culturas de células. A viabilidade celular foi mensurada pelo teste de redução do MTT (n=24/concentração/substância/células) e a genotoxicidade através de contagem de micronúcleos apenas para as concentrações das substâncias de 0,5% e 0,25% (número de micronúcleos/1000 células em cada contagem, 2 contagens), ambos em 24 horas após o contato de 15 minutos com as substâncias testadas. Os dados foram analisados por ANOVA complementado por teste de Tukey(p<0,05) para o MTT e qui-quadrado para genotoxicidade. Como resultados da viabilidade celular a dose letal de 50%(DL50) ocorreu apenas nas concentrações menores que 5% no G1, e ao redor de 1% para G2 e G3. Como resultados do teste de genotoxicidade os mesmos números de micronúcleos foram encontrados para todos os grupos em duas contagens de 1000 células. As células PDH3 apresentaram maior viabilidade que a FMM1 com maior número de células em concentrações maiores das substâncias testadas, demonstrando maior resistência de células menos diferenciadas. Como não houve diferença estatística no número de micronúcleos entre os grupos do teste de genotoxicidade inferimos que não houve aumento do número de micronúcleos entre os grupos de teste e o controle. Portanto, a solução de CHX a 2% quando aplicada sobre as células em cultura in vitro não foi biocompatível em concentrações de diluição acima de 0,5%; não foi genotóxica, pois não houve aumento na formação de micronúcleos nem com o grupo da clorexidina nem com a fase líquida da mistura ou com o precipitado.

New antimicrobial therapies have been introduced in Endodontics for periapical lesions and treatment-resistant infections. Alternating irrigating solutions such as 1% sodium hypochlorite (NaOCl) solution and 2% chlorhexidine (CHX) solution has shown promising results. However, inside the root canal system the NaOCl and CHX interact producing byproducts (Bps) represented by a liquid (Liq) and a solid precipitated (Sol) that remain on the canal walls. Objectives: To study the cytotoxicity of such Bps and CHX using cultured fibroblasts (FMM1) and stem cells(PDH3). Two cell lines were chosen to test if different differentiated cell types would present different survival results. Methods: Equal parts of 1% NaOCL and 2% CHX solutions were mixed and the Bps were obtained. Three drug solutions were tested: cell culture medium dilution of CHX, cell culture medium dilution of Liq and cell culture medium conditioned by the Sol byproduct. They were prepared in fresh medium in 4 different concentrations (100%, 1%, 0,5%, 0,25%) and applied to the cells for 15 minutes. In the control wells the cells grew on fresh medium. Cytotoxicity was measured by using the MTT reduction assay in 24 replicates per concentration per solution. Twenty-four hours later cell viability was analyzed. Micronucleus counting was used to check genotoxicity (number of micronucleus/ 1000 cell, 2 counting). Data was evaluated through ANOVA test with post hoc Tukey(p<0,05) for MTT assay and qui-square for genotoxicity. Lethal dose concentration 50%(LD50) was obtained in concentrations less than 0,5% with CHX and around 1% for Liq and Sol. there were obtained same number of micronucleous for all the substances tested. PDH3 cells presented higher survival rate to higher concentrations, so they were more resistant than FMM1. There was no statistical difference between control and tested groups for genotoxicity. 2% CHX solution when applied to cell cultures was not biocompatible in concentrations above 0,5%; there is no increase in micronucleous number with tested substances.

Efeitos da preparaçäo tridimensional de gel de colágeno I em linhagens celulares derivadas de adenoma pleomórfico, mioepitelioma e carcinoma adenóide cístico: estudo através da microscopia eletrônica de varredura / Effects of three-dimensional preparation of type I collagen on cell lines derived from pleomorphic adenoma, myoepithelioma and adenoid cystic carcinoma: study through scanning electron microscopy

Neoplasias de glândulas salivares originárias do ducto intercalado apresentam grande quantidade de matriz extracelular. Em trabalho anterior (Freitas et al., 1999), observamos que o colágeno I é fator de crescimento para células de uma dessas neoplasias, o carcinoma adenóide cístico. Agora avaliamos in vitro o papel do colágeno I na morfodiferenciaçäo do adenoma pleomórfico, do mioepitelioma e do carcinoma adenóide cístico. Para tanto utilizamos linhagens celulares derivadas dessas três neoplasias de glândula salivar (AP4, M1 e CAC2, respectivamente). As células foram crescidas durante 5 dias em preparaçäo tridimensional de colágeno I, numa situaçäo semelhante ao que ocorreria na neoplasia in vivo. Células controle cresceram sobre vidro. O efeito do colágeno I nas células AP4, M1 e CAC2 foi avaliado através da microscopia eletrônica de varredura. Observamos morfodiferenciaçäo em duas das três linhagens estudadas. A linhagem M1 apresentou células de formato poligonal ou arredondado, ao passo que as células CAC2 exibiram formaçäo de estruturas pseudocísticas. A linhagem AP4 apresentou células fusiformes e dendríticas semelhantes às células controle. Sugerimos que o colágeno I é um fator regulador dos fenótipos tanto do mioepitelioma, como do carcinoma adenóide cístico

Eficiência de métodos caseiros de higienizaçäo e limpeza de próteses parciais removíveis / Evaluation of the efficacy of cleaning methods for removable partial dentures

O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência de três métodos caseiros de higienizaçäo e limpeza de próteses, através de uma análise em microscópio eltrônico de varredura. Observou-se que o uso de escova de dentes e dentifrício näo foi eficiente na remoçäo da placa bacteriana da superfície da prótese. A associaçäo desse método mecânico com a imersäo da prótese em um produto químico efervescente à base de peróxido alcalino melhorou a higienizaçäo, em comparaçäo ao método anterior. A aplicaçäo de clorexidina a 2 por cento na parte interna da sela da prótese associada ao método mecânico foi mais eficiente que os outros métodos